胃癌患者腹腔液中透明質酸的表達
第二軍醫大學長征醫院普通外科  李揚  王強

摘要：為探索胃癌患者腹腔液中HA濃度與惡性腫瘤侵襲、擴散之間的關係，應用放射免疫方法(RIA)測定48例胃癌患者及非腫瘤患者腹腔液中的HA濃度，結果顯示胃癌患者的HA濃度顯著高於非腫瘤患者，已有轉移、擴散的胃癌組HA濃度明顯高於無轉移組。而肝硬化腹水患者的腹水HA濃度亦明顯增高。
結論：腹腔液HA濃度可能與腫瘤腹腔內轉移密切相關。
關鍵字：透明質酸   侵襲和轉移   胃癌   腹腔液
   透明質酸(hyaluronic acid,HA)是由葡萄糖醛酸以β1-3鍵N-乙酰氨基葡萄糖形成的重複二糖單位組成的，二糖單位彼此以β1-4鏈相互連接，其分子量非常大，可達一千萬。透明質酸系細胞外間質重要結構之一，在維持組織形態和保持組織抗壓縮性及張力方面起到重要作用(1)。近年來的研究表明，測定血清HA是診斷肝硬化的一項良好的血清學指標(2)(3)。同時，不少文獻報導HA與惡性腫瘤的生長、浸潤及擴散有關(4)。本文應用放射免疫分析法(RIA)測定了48例胃癌口才腹腔液中的HA濃度，以期探討腹腔液中HA與胃癌腹腔內侵襲、擴散之間的關係。

材料與方法

1999年10月至2000年5月間共收集48例胃癌患者的腹腔液。收集方法：術中進入腹腔後，即以注射器于病灶周圍取少量腹腔液，各約0.5ml-1ml不等；如無明顯腹水者，則以生理鹽水2ml注于病灶周圍沖洗後吸取送檢。根據術中探查及病理結果，將此48例胃癌患者分為PTNMⅠ+Ⅱ期組22例，PTNMⅢ+Ⅳ期組26例。按同樣方法收集胃潰瘍、膽囊結石等非腫瘤患者的腹腔液23例。所有手術患者均無腹腔炎症、肝硬化及重要臟器功能障礙。其中有直接抽取腹腔液者21例，通過局部沖洗抽取腹腔液者27例。另外通過腹腔穿刺收集15例肝硬化並腹水患者的腹腔液。所有病例中男45例，女41例，年齡16-77歲。胃癌組、非腫瘤組及肝硬化組各組之間年齡均數差異均無顯著性(P>0.05)。
   所收集的腹腔液及腹腔沖洗液送本院實驗科以放射免疫方法測定HA初始濃度。具體方法：50μl腹腔液先與100μl透明質酸結合蛋白(HABP)37℃溫度2小時，加入¹²⁵I-HA100μl，37℃水浴60分鐘後加入100μl第一抗體，繼續水浴30分鐘，再加入100μl第二抗體，37℃水浴30分鐘，3500轉/分離心15分鐘，棄上清液，測沉澱物放射性，從標準曲線求出腹腔液及腹腔沖洗液HA初始濃度(3)。同時，所有標本均以分光光度計進行蛋白定量測定。HA的濃度即為HA初始濃度與其蛋白定量值的比值。資料以x±s表示，用t檢驗等進行統計學處理。

結果

胃癌組腹腔液HA濃度為913μg/ml μg蛋白，顯著高於非腫瘤組的362μg/ml μg蛋白(p<0.001)。在胃癌組中，PTNMⅢ+Ⅳ組的1050μg/ml μg蛋白明顯高於PTNMⅠ+Ⅱ期組的814μg/ml μg蛋白(p<0.001)。肝硬化組亦明顯增高，為725μg/ml μg蛋白(p<0.001)。列表如下：

胃癌、肝硬化及其它患者腹腔液HA濃度比較(x±s，μg/ml μg蛋白)

在胃癌組中，可直接抽取到腹腔液者21例HA濃度為1217μg/ml μg蛋白，遠高於通過局部沖洗抽取腹腔液者27例的769μg/ml μg蛋白(p<0.001)。

直接抽取及局部沖洗抽取腹腔液者HA濃度比較(x±s，μg/ml μg蛋白)

討論

HA普遍存在於細胞外間質中(ECM)，是ECM的主要成分之一，正常情況下由間質細胞合成，參與組織重建、擴增組織間隙、炎症反應和腫瘤發生等過程。腹膜間皮細胞是腹腔內HA的主要來源，故HA是腹腔間皮細胞的功能性標誌之一(5)。已知在肝硬化、肺纖維化、類風濕性關節炎及惡性間皮瘤等患者的血清中，可檢測到顯著增高的HA。而局部應用HA可抑制或減輕腹部手術、化療後的腹腔內粘連及頸部手術後頸前肌群的粘連(6)。
    HA的細胞效應是通過細胞表面HA結合蛋白或HA結合受體結合後實現的。粘附分子CD44是HA的細胞表面受體。CD44與HA主要參與細胞-細胞，細胞-基質之間的特異性粘連過程，其相互作用對胚胎細胞發育、免疫應答及腫瘤生長、轉移具在重要意義。CD44是一種在淋巴細胞成熟和歸巢過程起重要作用的細胞表面粘附分子，起著介導內皮細胞、上皮細胞、成纖維細胞等與透明質酸的粘附並調節細胞移動和細胞形態。CD44還可能參與HA的降解，HA與CD44結合的意義目前還不清楚(7)。
    近年來一系列的研究均表明HA的高表達與腫瘤細胞生物學行為相關(8)。腫瘤的擴散、轉移勢必要通過對細胞外間質的破壞來實現。早期腫瘤患者HA可能無異常升高，而在腫瘤轉移過程中，可增加正常結締組織的溶解，從而使HA釋放。另外腫瘤還可能增加HA酶的抑制物、與其他細胞相互作用使其產生HA。腫瘤細胞還可能自行產生HA。正常人的胚胎組織含大量的HA，可高達2038.39μg/ml,故而腫瘤患者腹腔液的HA大量增加也可能是一種胚胎現象。Anttlia等觀察到細胞間質中高表達HA與惡性腫瘤的低分化、浸潤、擴散等行為顯著相關，但和CD44的高表達並不相關。細胞間質中HA的積聚可能是腫瘤進展、轉移擴散的強有力的促進因素之一，高表達的HA有可能成為判斷腫瘤預後的新的標誌物，並有可能成為腫瘤治療時抑制其轉移、擴散的靶物質(9)。Setala等也發現胃癌中HA為強陽性的癌細胞明顯具有侵襲、淋巴結和遠處轉移及低分化的傾向，認為HA的高表達與胃癌的惡性演進和低生存率相關(10)。
    本文結果顯示，胃癌患者腹腔液中的HA明顯高於非腫瘤患者，而具侵襲、轉移性的胃癌患者腹腔液中的HA亦高於無侵襲、轉移性者。我們認為HA可能與胃癌等惡性腫瘤腹腔內播散、轉移密切相關。腹腔液HA的測定可能有助於判斷腹腔內惡性腫瘤的浸潤、擴散情況及預後。通過臨床上應用的腫瘤患者術後腹壁埋置的皮下化療泵，可在術後腹腔內化療的同時抽取少量腹腔液進行HA測定，從而判斷腹腔患者術後腹壁埋置的皮下化療泵，可在術後腹腔內化療的同時抽取少量腹腔液進行HA測定，從而判斷腹腔內化療的效果及是否出現侵襲傾向或新的轉移灶。HA是否能作為癌腫腹腔內播散、轉移的標誌之一，尚有待於進一步深入研究。

參考文獻(略)